超微量分光光度計是一種應用于分析和檢測微小分子濃度的儀器,主要用于分析和檢測生物分子和化學分子的含量和質量。其工作原理基于分子吸收不同波長光線的能力,通過光線通過樣品引起的吸收程度來確定溶液的濃度。以下將詳細介紹其工作原理和使用方法。
一、工作原理
1.光源:超微量分光光度計使用的是可見光和紫外線的光源,普遍采用鹵素燈,陽極氧化鋁、聚酰亞胺和鎢激發燈等。
2.分光儀:分光儀通過將可見光和紫外線分解為不同的波長,根據不同波長的吸收情況來分析樣品的濃度。分光儀使用的是一組設計好的光柵來分離光線,每個光柵能夠分離一定范圍內的波長。
3.樣品池:樣品池是在分光儀中放置樣品的地方,通常采用石英或玻璃材質制成。
4.探測器:探測器是最重要的裝置之一,負責接受樣品池中吸收或透射的光,并將其轉化為電信號。探測器通常采用光電二極管或光電multiplier管。
二、使用方法
1.校準超微量分光光度計:在使用前,需要對光度計進行校準,以確保其讀數準確。校準過程中,需要使用標準物質,使用前需要將樣品池清洗干凈,在樣品池中加入標準物質和標準溶液,設置波長,記錄吸收測量值,并進行數據分析。
2.準備樣品:將待測樣品溶解在適當的溶劑中,將溶液放入潔凈的樣品池中。注意,樣品應該盡可能稀釋,以提高精度。
3.設置波長:選擇波長,將分光儀設置為樣品溶液所吸收的波長。
4.吸收測量:將樣品池放入分光光度計中,使其測量樣品的吸收值。在吸收測量過程中,要避免任何突然的振動,以及其他外來因素的影響,如電磁干擾等。
5.數據分析:將數據整理到工作文檔中,進行進一步的比較和分析。