核酸的定量是NanoDrop one超微量分光光度計使用頻率很高的一個功能，可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同，定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數。測試后的吸光值經過上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度。

    測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，然后測試空白液和樣品液，但是實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者比較頭痛的一個問題。

　　NanoDrop one超微量分光光度計允許吸光值在一定范圍內變化，即儀器有一定的準確度和度。另外，還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩定讀數。    樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低或者過高。

    后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值，混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈，必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大。換算系數和樣品濃度單位選擇一致，不能采用窗口磨損的比色杯。